產(chǎn)品名稱：標(biāo)記蛋白抗體/葡聚糖制備方法及操作步驟

產(chǎn)品描述：

標(biāo)記蛋白抗體/葡聚糖制備方法及操作步驟 ??一般每個(gè)抗體可以標(biāo)記3-5個(gè)，標(biāo)記時(shí)，與抗體的比率受抗體濃度影響，對(duì)于10 mg/ml 的抗體溶液來說，應(yīng)過蛋白12倍（摩爾數(shù)），對(duì)于2 mg/ml 的抗體溶液應(yīng)過20倍，也可以直接以粉末的形式加入蛋白溶液中。 ????蛋白樣品不得含有疊氮鈉、BSA、甘氨酸、Tris或其他有自由氨基的添加物。 一、試劑和器材： 1、 標(biāo)記反應(yīng)溶液：0.1M??pH 7.2?PBS（0.15M sodium chloride） NaCl 8.77 g?；Na2HPO4·12H2O 32.3g?；NaH2PO4·2H2O 4.5g；加雙蒸水 900mL 左右，用HCl/NaOH 調(diào)pH 7.2，后定容為 1000mL 2、 10mM NHS-dPEG4-Biotin配方：稱取0.56mg NHS-dPEG4-Biotin（分子量為587）?，溶解于95 μl 純水中，臨用前配置，不可儲(chǔ)存，立刻使用。NHS-PEG4-Biotin容易潮解，開瓶前平衡室溫。也可以配置200 nmol/L 儲(chǔ)備液：20mg NHS-dPEG4-Biotin?溶解于170μl DMSO中，-20℃穩(wěn)定幾個(gè)月。 由于NHS-PEG4-Biotin昂貴，而且使用量少，不能保存，配制時(shí)，直接將NHS-PEG4-Biotin放入1.5ml EP管中，以實(shí)際稱量的NHS-PEG4-Biotin按比率加入純水。 3、濾管 ⑴、Millipore濾管[0.5ml 10KD]:截留分子量10KD，殘留體積200μl，蛋白回收率95%，7500×g（允許的大離心力14000×g）離心10min。 ⑵、Millipore濾管[0.5ml 50KD]:截留分子量50KD，殘留體積80μl，蛋白回收率94%，7500×g（允許的大離心力14000×g）離心5 min。 ⑶、Amicon Ultra -0.5ml離心濾管（Millipore），，的終濃縮物體積：5-15ul。 二、抗體濾處理 標(biāo)記前需要應(yīng)用截留分子量為50kDa 的濾柱對(duì)抗體進(jìn)行標(biāo)記前純化處理(如果不是抗體，要按蛋白分子量來確定濾柱截留分子量)，以除去蛋白樣品中可能含有的疊氮鈉、BSA、甘氨酸、Tris或其他有自由氨基的添加物，干擾標(biāo)記反應(yīng)。 具體操作步驟： 1、 于濾柱中加入200μl 標(biāo)記反應(yīng)溶液，加入500ug 單克隆抗體，混勻。 2、 4℃，6000rpm，離心2min。棄濾液。 3、于濾柱中加入100μl 標(biāo)記反應(yīng)溶液，混勻。4℃，Max 14000×g，2min。 4、 重復(fù)步驟2 6到7次。 5、 混勻?yàn)V柱中的殘留的液體，室溫靜置1min。 6、 將濾柱反轉(zhuǎn)倒置于一新的濾管中，4℃，1000×g，2min，收集濾液。 7、 取50μl PBS于濾柱中混勻，靜置1min。 8、 倒置濾柱，4℃，6000rpm，2min。收集濾液，與步驟6的濾液合并，4℃放置備用。用標(biāo)記反應(yīng)溶液調(diào)節(jié)抗體濃度到2mg/ml （0.25ml）。 三、標(biāo)記抗體 1、 計(jì)算抗體標(biāo)記需要用量。? ????抗體濃度?2?mg/ml時(shí)的簡(jiǎn)要計(jì)算： 1mL of 2?mg/mL?IgG (150,000 MW)需要26?μL of ?10mM ?NHS-PEG4-Biotin 具體計(jì)算方式見附錄一（標(biāo)記計(jì)算） 2、 濾后的濾液加入NHS-PEG4-Biotin溶液，室溫反應(yīng)1h。 3、?葡聚糖凝膠分離純化(游離)： 四、葡聚糖凝膠分離純化標(biāo)記抗體操作步驟： ???（一）、試劑： ?1、純化柱處理液 :100?mmol/L?Na0H; ?2、純化柱平衡液:?50mmol/L?Tris-HCl緩沖液(pH7.4)，每升含0.5g NaN3?，8g NaCl; 3、樣品洗脫液:同純化柱平衡液; 4、標(biāo)記抗體保護(hù)液（50×）:?10ml0.01M pH7.2 PBS 中加入0.5g BSA，0.2g NaN3。 ? （二）、凝膠過濾： ????方法見“凝膠過濾法純化微量標(biāo)記蛋白” 五、標(biāo)記抗體的保存方法 ????將“標(biāo)記抗體保護(hù)液（50×）”加入到標(biāo)記抗體溶液中，使BSA終濃度為0.1%，4 ℃?或-20 ℃?保存。 ? 六、數(shù)據(jù)記錄： 抗體濃度： ???mg/ml ???????加入抗體體積： ???μl 標(biāo)記前抗體體積： ??μl ?????加入NHS-PEG4-Biotin體積： ???μl 純化柱規(guī)格： ?cm ×???cm???凝膠體積： ????ml 加入標(biāo)記抗體體積：???μl ??????? 洗脫溶液 1ml/管收集，到核酸蛋白檢測(cè)儀顯示出峰后，改為0.5ml/管收集，并記錄數(shù)據(jù)： 管號(hào) 1 2 3 4 洗脫液體積 ? ? ? ? A280 ? ? ? ? 管號(hào) 5 6 7 8 洗脫液體積 ? ? ? ? A280 ? ? ? ? 管號(hào) 9 10 11 12 洗脫液體積 ? ? ? ? A280 ? ? ? ? ?? 附錄： 一、標(biāo)記計(jì)算： ???1、不同抗體濃度時(shí)，抗體與Sulfo-NHS-Biotin的比率： ?????Sulfo-NHS-Biotin?MW：589 ? Sulfo-NHS-Biotin：抗體 抗體濃度10-12mg/ml時(shí) 12 抗體濃度4-7mg/ml時(shí) 16 抗體濃度1-3 mg/ml時(shí) 20 抗體濃度0.5mg/ml時(shí) 50 ?? 2、10mmol/L Sulfo-NHS-Biotin?配方： Sulfo-NHS-Biotin ????????????????（mg) PBS（μl) Sulfo-NHS-Biotin ????????????????（mg/μl) 0.56 95.1 0.00589 ? ?3、標(biāo)記計(jì)算加入體積計(jì)算： ? 計(jì)算公式 抗體濃度 ??2?mg/ml時(shí)* 抗體濃度（ mg/ml） ? 4.5 抗體加入量（ml) ? 0.11 抗體加入量（mg) ?抗體濃度×抗體加入量 0.495 抗體的毫摩爾數(shù)（其他蛋白注意分子量） 抗體加入量/1500000 0.0000033 需要的活化Biotin量（mmol） 抗體的毫摩爾數(shù)×20 0.000066 活化Biotin量（mg） Sulfo-NHS-Biotin量 （毫摩爾）×589 0.038874 需要10mmol/L 活化Biotin體積（μl） 活化Biotin量（mg） /活化Biotin濃度（mg/μl) 6.6 西安齊岳生物可以提供的定制材料包括有： dUTP-biotin Biotin-Ubiquitin 修飾的納米銀探針 化的殼聚糖Bio-CS 星形七臂官能化聚己內(nèi)酯(CDSPCABCL) 修飾的Pluronic普朗尼克 修飾二茂鐵Biotin-Fc AP-tag標(biāo)簽的FOXM1真核表達(dá)載體 Biotin-PEG-PLLA-PLL 聚乙二醇-聚乳酸-二丙烯酸酯(PPA)共聚物 Mpeg-b-PCL-b-PPEEA聚乙二醇-聚已內(nèi)酯-聚（氨乙基乙撐磷酸酯） PLGA-PPEEA 聚（氨乙基乙撐磷酸酯）-聚乳酸-羥基乙酸共聚物 PTMC-PEG-PTMC 修飾的冬凌草甲素脂質(zhì)體 /雙配體修飾的殼聚糖材料 FA-CS-g-PSBMA?-殼聚糖-磺酸甜菜堿 乳糖修飾殼聚糖 乳糖修飾去甲素(Lac-NCTD) 去甲素殼聚糖納米粒(NCTD-CS-NPs) Biotin偶聯(lián)乳糖 半乳糖化殼聚糖接枝聚乙烯亞胺galactosylated chitosan-g-PEI RGD多肽偶聯(lián)殼聚糖chitosan 半乳糖修飾的巰基化殼聚糖 甘草酸表面修飾殼聚糖GA-chitosan 甲氨喋呤-乳糖酰基殼聚糖MTX-殼聚糖 甲氨蝶呤化殼聚糖納米粒MTX-Biotin-CS 修飾β2微球蛋白 修飾稀土摻雜無機(jī)熒光納米顆粒 修飾螢火蟲熒光素酶 化微細(xì)纖維肽修飾IGF-1 修飾水溶性共軛聚合物(PFPNBr-biotin) BDNF-PEG-biotin 化乙酰普魯蘭多糖 FAM-Biotin,FITC-Biotin綠色熒光標(biāo)記 Biotin-NHS活化脂修飾 PHEMA-biotin 修飾聚(甲基丙烯酸-2-羥乙酯) PLGA-Biotin?修飾PLGA Biotin修飾紅細(xì)胞膜 poly(NIPAAm-co-Ada) 修飾的多肽RGD Biotin修飾CdTe量子點(diǎn) 化修飾的聚己內(nèi)酯(PCL/Biotin) Biotin-PEG-b-Leu 鏈霉親和素化的量子點(diǎn)(streptavidin-QDs) Prazosin-PEG2000-biotin (Biotin)表面功能化修飾多壁碳納米管 Biotin-PEG-PLL-peptide-DOX PLL-PEG-Biotin Biotin-PEG-c(RGDyK) biotin-HWTX-Ⅰ標(biāo)記蛛素虎紋捕鳥蛛素-Ⅰ ssDNA-Biotin-SA-AuNPs復(fù)合物 標(biāo)記的透明質(zhì)酸(HA-biotin PAH-Biotin修飾半 Biotin-Ebselen小分子探針 偶聯(lián)四氨基卟啉 膽堿磷酰化偶聯(lián)殼聚糖 Chol-Dex-Biotin?偶聯(lián)葡聚糖修飾 DOTA-Biotin偶環(huán)配體造影 藻膽蛋白標(biāo)記Phycobiliprotein-Biotin 藻膽蛋白-鏈霉親和素(Streptavidin-phycobiliprotein) 偶聯(lián)物OVA-ZEN-biotin (Biotin)偶聯(lián)的多肽zs6 Biotin-DNA偶聯(lián)物 雞卵清白蛋白偶聯(lián)(Biotin-OVA) 輔酶A-(Coenzyme A-biotin) FITC標(biāo)記的轉(zhuǎn)鐵蛋白(Tf-FITC) (biotin)修飾的ddNTP核苷酸 活化的轉(zhuǎn)鐵蛋白(Biotin-Tf) HEMA-biotin-Lys-CD 蛤蚌素-偶聯(lián)物 姜黃素-偶聯(lián)物 多肽CRGD修飾紅細(xì)胞膜 偶聯(lián)膽甾醇化乙二醇?xì)ぞ厶? -葡聚糖聚醛偶聯(lián)物(Chol-Dex-CHO) BIO修飾阿霉素DOX-biotin 修飾科研BIOTIN-Drud CY3/CY5/CY5.5-Biotin修飾熒光染料 溫馨提示：西安齊岳生物科技有限公司供應(yīng)的產(chǎn)品用于科研，不能用于人體、科研研究、和其他商業(yè)用途，如有購(gòu)買方或方采購(gòu)我公司的產(chǎn)品用于、科研研究或商業(yè)用途，購(gòu)買方或方將承擔(dān)法律責(zé)任，我公司也將追究其法律責(zé)任以上產(chǎn)品均可定購(gòu) ? 相關(guān)目錄： Biotin-PEG2-C4-alkyne|cas1011268-28- H2N/Amino-PEG2-COOH；氨基-二聚乙二醇

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